多色标记免疫荧光TMA样本案例分析

发表于:2022-06-16


TMA容纳了大量的信息,可以在短时间内进行高通量、快速、平行的检测,并且可以在多个实验指标中进行大量的大批量组织样品,从而大大提高了实验效率。此外,在TMA上比较多样本。

可以排除一系列复杂因素导致的组内或批间差异,多色标记免疫荧光 使一次性多样本比较分析的准确性大为提高。

试验目的:目标蛋白在肠上皮的表达及相关蛋白共定位分析实验流程:

采用TisueFAX Spectra多光谱全景组织进行全景图像扫描和定量分析。

拆分光谱通道时使用StrataQuest分析软件。

利用DAPI通道定位识别细胞核——对620通道细胞质染色阳性细胞进行识别及定量分析——对与620共标的通道进行定量分析

分析流程:

在光谱图像获取阶段,TissueFAXS系统通过对组织区域进行预览,根据每个TMA点的轮廓建立ROI区域后,对每个ROI区域影像进行获取。在分析阶段,TissueFAXS拥有的TMA重排功能,可以针对每一个ROI区域进行重排,获得可以实时缩放的、包含所有TMA点的全景影像。此功能解决了由于样本制备操作不当,导致的TMA芯片纵横距离差异问题,以获得更美观、更便于观察对比的图像信息。

通过缩放功能与图像选择功能,多色标记免疫荧光 可以对原始图像及拆分后的单通道染色图像进行任意查看;利用通道自由组合/叠加功能,研究者可以独立分析目标Marker相互作用关系。对于每个原始通道和叠加后通道,可以单独调节高亮信号与背景的显示效果,以及改变伪彩颜色。

在组织原位,存在核形态不规则、核叠加、核黏连等现象,导致对细胞核内信号及细胞质内信号的定量分析产生误差。TissueFAXSCytometry可以根据细胞核大小与形态等参数,结合散点图的设门圈选,与原始图像的实时联动校验,排除对分析结果可能产生误差的数据。另外,具有热力图展示功能,在二维散点图的基础上,利用不同颜色标注了数据的聚集程度,为设置Cutoff及Gate提供更多的参考标准。

根据细胞质是否有620通道的Marker染色,以及染色的强弱/染色的形态,综合判断是否为细胞质染色阳性的细胞表型。通过指定细胞核周的判读半径及强度阈值,可以准确识别620通道阳性细胞。

在筛选出620通道阳性细胞后,根据相同的原理,对620通道阳性细胞中的540通道阳性细胞进行准确识别与定量分析。       

此外,TissueFAXSCytometry拥有的散点图-热力图-数据同屏叠加对比功能,多色标记免疫荧光 可以整合多种数据分析的二维图像,便于研究者们直观的对比与校验;同时结合图像同屏对比功能,不但可以同屏预览,还可以支持多点实时联动缩放,便于观察/分析图像,打通信息分析时数据-图像之间的屏障。

以上就是今日小编为大家介绍的多色标记免疫荧光,感谢大家耐心的阅读!


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